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Cat. Number
HC80201-04
Chemical Name
HC80201-04 Cas14a crRNA设计合成与纯化
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Cas14a crRNA设计合成与纯化

CRISPR/Cas系统是一种原核生物的免疫系统,用来抵抗外源遗传物质的入侵,比如噬菌体病毒和外源质粒。同时,它为细菌提供了获得性免疫:这与哺乳动物的二次免疫类似,当细菌遭受病毒或者外源质粒入侵时,会产生相应的“记忆”,从而可以抵抗它们的再次入侵。CRISPR/Cas系统可以识别出外源DNA,并将它们切断,沉默外源基因的表达。这与真核生物中RNA干扰(RNAi)的原理是相似的。正是由于这种精确的靶向功能,CRISPR/Cas系统被开发成一种高效的基因编辑工具。


Cas14a核酸酶是一种内切核酸酶,其在tracrRNA:crRNA(或sgRNA)的引导下,特异结合并切割靶标ssDNA,且无需PAM位点。相比于其他的Cas蛋白,Cas14蛋白的分子量普遍较小(400-700AA),其中,上海惠诚生物提供的Cas14a的分子量仅为为64.9 kd(含有3.4 k的N端标签序列)。与Cas12类似,Cas14a也可以结合靶标核酸并激活其ssDNA反式切割活性,从而被应用于靶标核酸的分子检测。然而,与Cas12不同的是,Cas14a1只能结合ssDNA靶标,因此:经过扩增富集的靶标核酸需使用T7核酸外切酶进行处理,且其中一条扩增引物需要实验磷硫酰化修饰以确保T7核酸外切酶仅切割其中一条链,从而留下ssDNA靶标链以用于Cas14a介导的分子检测。使用CRISPR/Cas12a编辑基因成败的关键就在于crRNA。


CRISPR-Cas14a特点:

CRISPR Cas14a蛋白组装复合物的RNA质量分别为48%,CRISPR Cas9蛋白和Cas12a蛋白分别为17%和8%。RNA在CRISPR Cas14a蛋白结构中扮演着重要的角色。

CRISPR Cas14a蛋白不需要识别底物DNA里的PAM位点,而CRISPR Cas9蛋白需要识别富含G的PAM,CRISPR Cas12a蛋白需要识别富含T的PAM。

CRISPR Cas14a蛋白是最小的RNA介导的cas蛋白,为~400-700aa, 是cas9蛋白(~950-1400aa)的一半。

CRISPR Cas14a蛋白识别切割单链DNA(ssDNA),具有很高的保真度。与Cas12a蛋白类似,在特异性切割ssDNA后,其附属切割活性被激活,由此活性开发了DETECTR检测方法。

cas14a.png

上海惠诚生物提供Cas14a crRNA设计合成与纯化。


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