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Cat. Number
HC80201-03
Chemical Name
HC80201-03 Cas13a crRNA设计合成与纯化
Qty 1
1套
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Cas13a crRNA设计合成与纯化

CRISPR/Cas系统是一种原核生物的免疫系统,用来抵抗外源遗传物质的入侵,比如噬菌体病毒和外源质粒。同时,它为细菌提供了获得性免疫:这与哺乳动物的二次免疫类似,当细菌遭受病毒或者外源质粒入侵时,会产生相应的“记忆”,从而可以抵抗它们的再次入侵。CRISPR/Cas系统可以识别出外源DNA,并将它们切断,沉默外源基因的表达。这与真核生物中RNA干扰(RNAi)的原理是相似的。正是由于这种精确的靶向功能,CRISPR/Cas系统被开发成一种高效的基因编辑工具。


Crispr Cas13a核酸酶(又名 C2c2)是依赖于 RNA 介导的 RNA 内切核酸酶。在靶标单链 RNA 存在 PFS序 列的情况下,可特异地切割靶标 RNA。此外,Cas13a 还具有依赖于靶标单链 RNA 的反式切割活性 (即,旁路切割活性),可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒。例如,MIT 的张锋团队便利用 Cas13a 蛋白开发了名为“SHERLOCK”的下一代分子诊断系统。相比上海惠诚生物自主开发的依赖于 Cas12 的 HOLMES系统,SHERLOCK 所使用的 Cas13a 蛋白识别靶标 RNA 并反式切割 RNA报告探 针。一般来说,RNA 报告探针的两端分别为荧光基因和淬灭基团标记,其在被 Cas13a 切碎之后便 可以发出可被检测的荧光。类似地,可以在 RNA 报告探针的两端分别标记上 FITC(/FAM)和 Biotin,然后结合胶体金试纸条进行快速、便捷地检测。

  

Cas13a的作用机制:

大家都知道,Cas9利用tracrRNA和crRNA来实现与DNA目标的结合和切割。不过,Cas13a只需要24个碱基的crRNA,它通过富含尿嘧啶的茎环结构与Cas13a分子相互作用,并通过Cas13a的一系列构象变化来促进目标的切割。与Cas9一样,Cas13a也能容忍crRNA与目标序列之间的单个错配,不过若存在2个错配,那切割效率就大大降低。它的PFS序列(相当于PAM序列)位于间隔区的3’端,由A、U 或C碱基组成。

CAS13a.png

上海惠诚生物提供Cas13a crRNA设计合成与纯化。


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