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Cat. Number
HC80201-02
Chemical Name
HC80201-02 Cas12a crRNA设计合成与纯化
Qty 1
1套
References

Cas12a crRNA设计合成与纯化

Cas12a 核酸酶(其他名称 Cpf1)是依赖于 RNA 介导的内切核酸酶,在靶标 DNA 存在 PAM 的情况下, 可特异地切割靶标双链 DNA。与 Cas9 不同:(1)Cas12a 只需要单个 crRNA,且体积更小、更易 被递送至细胞中;(2)Cas12a 切割后产生粘性末端,更利于基因组精确编辑;(3)Cas12a 的切 割位点远离其识别位点,为连续多次编辑提供了可能性;(4)Cas12a 识别的 PAM 序列与 Cas9 不 同,因此提供了不同编辑位点的选择;针对不同的 Cas12a 蛋白,其识别靶标所需的 PAM 位点不 同,其中部分 Cas12a 蛋白识别 TTN 位点,部分 Cas12a 蛋白识别 TTTN 位点。


Cas12a仅需在crRNA引导下即可识别靶标dsDNA,并靶向富含T的PAM位点,对靶序列进行特异性切割,同时附带非特异性切割ssDNA的活性。基于Cas12开发的分子诊断技术主要有DETECTR和HOLMES,其中HOLMES将Cas12a更换为Cas12b后,进一步升级为HOLMES v2。该三种方法原理类似,主要区别是对靶标扩增方法的选择不一样。首先,靶标核酸经等温(RPA或LAMP)或变温(PCR)方法扩增富集;然后,扩增产物与Cas12-crRNA结合,激活Cas12的附属切割功能,对ssDNA荧光探针进行切割,释放荧光基团,形成检测信号。使用CRISPR/Cas12a编辑基因成败的关键就在于crRNA。

CAS12a.png

上海惠诚生物提供Cas12a crRNA设计合成与纯化。

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